EphA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400535-ACT

EPHA2 codifica a EphA2, uma tirosina quinase receptora da família das efrinas que medeia sinalização dependente de contato para coordenar a comunicação célula–célula, a remodelação do citoesqueleto e a formação de limites teciduais. Após a ligação de ligantes ephrin-A, EphA2 influencia cascatas a jusante, incluindo as GTPases da família Rho, MAPK/ERK, PI3K/AKT e a dinâmica de adesões focais, modulando programas de adesão, migração e proliferação. Em contextos epiteliais e endoteliais, EphA2 contribui para a morfogênese e a organização de barreiras, e sua desregulação é frequentemente estudada em relação à sinalização oncogênica, a fenótipos associados à invasão e a respostas angiogênicas alteradas. Como receptor de superfície que integra sinais do microambiente, EPHA2 serve como um nó acessível para dissecar redes de sinalização acionadas por receptores e a comunicação cruzada entre vias próximas à membrana.

EphA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EPHA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EphA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EPHA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EPHA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EphA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EPHA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EphA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EphA2 em células tumorais com expressão de EPHA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.