eotaxin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422835

Panoramica

Il gene murino **Ccl11** codifica l’eotaxina, una chemochina della famiglia CC che promuove il reclutamento selettivo degli eosinofili legandosi a **CCR3** e modulando il traffico leucocitario nei tessuti infiammati. La produzione di eotaxina da parte di cellule epiteliali, fibroblasti e cellule immunitarie favorisce chemotassi, adesione e infiltrazione tissutale, integrandosi con reti di citochine come la segnalazione **IL-4/IL-13** e con programmi infiammatori a valle regolati da **MAPK** e **NF-κB**. **Ccl11** è ampiamente studiato in modelli di infiammazione allergica delle vie aeree, dermatite atopica e infiammazione eosinofilica gastrointestinale, in cui l’accumulo di eosinofili contribuisce al rimodellamento e alla disfunzione della barriera. Oltre all’allergia, alterazioni della segnalazione **Ccl11/eotaxina** sono state associate al dialogo neuro‑immunitario e all’infiammazione legata all’età, rendendolo rilevante per studi a livello di sistema sulla patologia guidata dalle chemochine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eotaxin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl11 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eotaxin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl11 per lo studio della segnalazione di eotaxin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl11 critici per la funzione di eotaxin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eotaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal eotaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eotaxin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR eotaxin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.