eotaxin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403103-ACT

CCL11 codifica a eotaxina (CCL11), uma quimiocina CC secretada que se liga ao CCR3 para direcionar a quimiotaxia de eosinófilos e de outros leucócitos que expressam CCR3 para locais de inflamação. A sinalização da eotaxina coordena o tráfego, a adesão e a ativação de leucócitos em compartimentos mucosos e vasculares, moldando respostas imunes do tipo 2 e programas de remodelação tecidual. A expressão desregulada de CCL11 tem sido associada à inflamação alérgica e à asma, bem como a microambientes inflamatórios mais amplos, nos quais o recrutamento de eosinófilos e o diálogo cruzado de citocinas influenciam a patologia. Em modelos celulares humanos, a modulação de CCL11 fornece um readout viável para estudar redes de quimiocinas, sinais de migração de leucócitos e regulação transcricional induzida por citocinas.

eotaxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCL11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eotaxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCL11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCL11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eotaxin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCL11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eotaxin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eotaxin em células tumorais com expressão de CCL11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.