eotaxin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405762

Panoramica

CCL26 codifica l’eotaxina-3, una chemochina della famiglia CC che si lega a CCR3 per guidare la chemiotassi e l’attivazione di eosinofili, basofili e cellule immunitarie polarizzate verso Th2. La sua espressione è comunemente indotta nei compartimenti epiteliali e stromali dal segnale di IL-4/IL-13 attraverso l’asse JAK–STAT6, collegandola a programmi infiammatori di tipo 2 e al traffico leucocitario. L’eotaxina-3 contribuisce alla regolazione dell’infiammazione tissutale, delle risposte immunitarie associate alle barriere e all’amplificazione della rete citochine–chemochine. Un’alterata regolazione di CCL26 e livelli elevati di eotaxina-3 sono stati riportati in condizioni infiammatorie allergiche e associate agli eosinofili, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca sull’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eotaxin-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCL26 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCL26 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCL26 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eotaxin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCL26 per lo studio della segnalazione di eotaxin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCL26 critici per la funzione di eotaxin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCL26 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eotaxin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eotaxin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCL26. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eotaxin-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eotaxin-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCL26 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCL26 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.