ENT2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401952-NIC

SLC29A2 codifica o transportador equilibrativo de nucleosídeos 2 (ENT2), um transportador de membrana plasmática amplamente expresso que medeia o fluxo bidirecional, dependente de concentração, de nucleosídeos de purinas e pirimidinas. O ENT2 sustenta vias de salvamento de nucleosídeos que mantêm os pools de nucleotídeos para a síntese de DNA/RNA e contribui para respostas celulares ao estresse metabólico ao regular a disponibilidade de nucleosídeos intra e extracelulares. Ao modular a homeostase de nucleosídeos, o ENT2 se conecta a processos como progressão do ciclo celular, respostas ao estresse replicativo e sinalização dependente de nucleosídeos em muitos tecidos. Alterações na atividade e na expressão de SLC29A2/ENT2 têm sido investigadas em contextos que incluem biologia tumoral, função de células imunes e variações relacionadas a transportadores na sensibilidade celular a análogos de nucleosídeos, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos.

ENT2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SLC29A2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SLC29A2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SLC29A2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SLC29A2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.