ENT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419988

概要

Slc29a2 は、平衡型ヌクレオシドトランスポーター2（ENT2）をコードする。ENT2 は広く発現する形質膜トランスポーターであり、アデノシンやイノシンなどのプリン／ピリミジン系ヌクレオシドを、濃度勾配に依存して双方向に輸送する。ENT2 はヌクレオシドのサルベージ経路、細胞内ヌクレオチドプール、ならびに細胞外アデノシンの恒常性の調節に寄与し、その結果として DNA／RNA 合成、細胞エネルギー代謝、プリン作動性シグナル伝達に影響を及ぼす。マウス系では、ENT2 活性の変化は、代謝ストレス応答、ヌクレオシドの利用可能性により駆動される免疫・炎症シグナル、さらにトランスポーターを介した薬剤やヌクレオシドアナログの取り込み調節に関する研究において重要である。そのため Slc29a2 は、ヌクレオシド輸送を増殖・分化・組織恒常性と結び付けて検討する文脈で頻繁に解析される。

ENT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc29a2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc29a2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc29a2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ENT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ENT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc29a2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ENT2の機能に不可欠なSlc29a2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc29a2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ENT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびENT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc29a2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ENT2 HDRプラスミド（m）および ENT2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc29a2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc29a2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。