Enigma CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403254-ACT

ヒトPDLIM7はEnigmaをコードしており、EnigmaはPDZ–LIMドメインをもつアダプタータンパク質で、アクチン細胞骨格およびフォーカルアドヒージョン関連構造に局在し、シグナル伝達複合体を細胞骨格リモデリングへと結び付けます。Enigmaは、接着斑およびストレスファイバー・ネットワーク内でのタンパク質間相互作用を協調させることでメカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）と細胞運動プログラムに関与し、細胞の構築や分化を制御する経路に影響を与えます。足場（スキャフォールド）機能を介して、PDLIM7は心筋および骨格筋の組織化に関わる文脈で研究されてきました。これらの組織では、細胞骨格の完全性と転写制御が密接に連関しています。文献上、PDLIM7の発現や局在の異常は、細胞移動や組織リモデリングの表現型の変化と関連付けられており、心血管生物学や腫瘍生物学に関わる現象として報告されています。

Enigma CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDLIM7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Enigma CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDLIM7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDLIM7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Enigmaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDLIM7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEnigma依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDLIM7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEnigma経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。