Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403871-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EDN2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Endothelin-2/EDN2/ET-2: sc-293248
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403871-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403871-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EDN2 kodiert Endothelin‑2 (ET‑2), ein sezerniertes vasoaktives Peptid aus der Endothelin‑Familie, das hauptsächlich über die Endothelinrezeptoren ETA (EDNRA) und ETB (EDNRB) signalisiert, um die Kontraktion glatter Muskulatur, den Gefäßtonus und die parakrine Kommunikation zu regulieren. ET‑2 aktiviert eine G‑Protein‑gekoppelte Signalübertragung, die den intrazellulären Calciumfluss, PKC/MAPK‑Kaskaden sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme moduliert und damit Proliferation, Migration und den Umbau der extrazellulären Matrix beeinflusst. Die EDN2‑Expression ist in reproduktiven Geweben sowie unter Hypoxie und Entzündung streng reguliert und wird dadurch mit Prozessen wie der ovulationsassoziierten Follikelruptur, angiogenen Antworten und der Rekrutierung von Immunzellen in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation der Endothelin‑Signalgebung wurde an kardiovaskulärem Remodeling, fibrotischen Phänotypen und Veränderungen des tumorgebundenen Mikroumfelds beteiligt, was EDN2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien GPCR‑getriebener Signalwege macht.
Endothelin-2/EDN2/ET-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EDN2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EDN2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EDN2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EDN2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.