Plasmide Double Nickase (h) Emx1: sc-402711-NIC

EMX1 code le facteur de transcription à homéoboîte Emx1, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui contribue à régir la mise en place du télencéphale dorsal et la corticogenèse au cours du neurodéveloppement humain. Emx1 régule des programmes d’expression génique liés à la spécification du destin neuronal, à la prolifération des progéniteurs et à l’identité régionale, en s’intégrant à des réseaux transcriptionnels plus larges qui coordonnent le développement du cerveau antérieur. La perturbation des circuits régulateurs associés à EMX1 est pertinente pour l’étude des mécanismes à l’origine de phénotypes neurodéveloppementaux et d’une organisation corticale altérée, et EMX1 est fréquemment utilisé comme locus de référence pour évaluer les performances de l’ingénierie génomique dans les cellules humaines. En tant que facteur de transcription nucléaire, Emx1 constitue un modèle accessible pour explorer comment les programmes transcriptionnels du développement façonnent les transitions d’état cellulaire et les choix de lignée.

Emx1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EMX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EMX1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EMX1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EMX1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.