EMSY CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405722-ACT

EMSYは、BRCA2に結合し、DNA損傷応答の制御、転写制御、ゲノム安定性の維持に関与する核内のクロマチン関連タンパク質をコードします。クロマチンリモデリング因子や修復因子との相互作用を介して、EMSYは相同組換え能、複製ストレスシグナル伝達、細胞周期チェックポイントの協調制御に影響を及ぼし得ます。EMSYの発現量やコピー数の変化は、DNA修復能の破綻や、腫瘍性形質を支える転写プログラムの異常と関連し、複数の腫瘍コンテキストで報告されています。そのためEMSYは、クロマチン動態、BRCA2関連の修復生物学、そしてゲノム不安定性に駆動される疾患機構を結び付ける経路において、頻繁に研究対象となっています。

EMSY CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EMSYの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EMSY CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EMSY 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEMSY転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EMSYの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEMSY遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEMSY依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEMSY発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEMSY経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。