EMMPRIN/CD147 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419369-ACT

マウスBsgは、広く発現する免疫グロブリンスーパーファミリーの糖タンパク質であるEMMPRIN/CD147をコードしており、複数の組織において細胞間相互作用、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、代謝カップリングを制御する。CD147はマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）の誘導を促進し、モノカルボン酸トランスポーター（MCT1/MCT4）のトラフィッキングを支えることで、乳酸輸送を解糖系の再プログラミングおよび組織微小環境の動態と結び付ける。さらに、白血球のトラフィッキング、血管新生シグナル、上皮—間質間クロストークなどの過程にも関与するため、Bsgは炎症、線維化、腫瘍—間質相互作用を研究するうえで有用な結節点となる。CD147活性の変化は、病的なマトリックス回転や浸潤性表現型と関連づけられており、心肺、腎臓、がん生物学モデルにわたって機序的な重要性を与える。

EMMPRIN/CD147 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Bsgの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EMMPRIN/CD147 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Bsg 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBsg転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EMMPRIN/CD147の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBsg遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEMMPRIN/CD147依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBsg発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEMMPRIN/CD147経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。