Plásmido CRISPR de Activación (h) Embigin: sc-408321-ACT

El gen humano **EMB** codifica **embigina**, una glucoproteína transmembrana de tipo I de la superfamilia de las inmunoglobulinas que actúa como subunidad accesoria de los transportadores de monocarboxilatos y modula las interacciones célula–célula y célula–matriz. Al favorecer el flujo de lactato y piruvato a través de complejos MCT, la embigina contribuye a la homeostasis metabólica, la regulación del pH y la adaptación al microambiente en tejidos proliferativos. La biología asociada a **EMB** se cruza con vías que gobiernan la adhesión, la migración y el aprovechamiento de nutrientes, procesos que con frecuencia se reprograman en la oncogénesis y en estados inflamatorios. Se ha descrito una expresión desregulada de la embigina en múltiples contextos asociados a enfermedad, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la remodelación metabólica y la invasividad celular.

Embigin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EMB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Embigin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EMB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EMB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Embigin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EMB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Embigin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Embigin en células tumorales con expresión de EMB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.