Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EKLF/KLF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402366-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EKLF/KLF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EKLF/KLF1 Double Nickase Plasmid (h) e il EKLF/KLF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KLF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EKLF/KLF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EKLF/KLF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano KLF1 (EKLF) codifica un fattore di trascrizione di tipo Krüppel, ristretto alla linea eritroide, che si lega agli elementi CACCC per coordinare l’espressione genica specifica di stadio durante l’eritropoiesi. EKLF/KLF1 regola il controllo del locus della globina, i programmi di membrana e citoscheletro degli eritrociti, la biosintesi dell’eme e l’uscita dal ciclo cellulare attraverso reti trascrizionali che includono BCL11A, KLF3 e geni della maturazione eritroide. Modellando l’accessibilità della cromatina e la trascrizione a livello di enhancer e promotori eritroidi, KLF1 influenza lo switching dell’emoglobina e le traiettorie di differenziamento dei globuli rossi. Alterazioni genetiche di KLF1 sono associate a uno sviluppo eritroide modificato e a pattern di espressione dell’emoglobina diversi, a supporto della sua rilevanza per modellare fenotipi ereditari dei globuli rossi e i meccanismi di regolazione della globina.
EKLF/KLF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.