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EKLF/KLF1双切口酶质粒(h) | sc-402366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EKLF/KLF1双切口酶质粒(h2) | sc-402366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人源 KLF1(EKLF)编码一种在红系细胞中受限表达的 Krüppel-like 转录因子,可结合 CACCC 元件,在红细胞生成过程中协调阶段特异性的基因表达。EKLF/KLF1 通过包含 BCL11A、KLF3 以及红系成熟相关基因在内的转录网络,调控珠蛋白基因座控制、红细胞膜与细胞骨架程序、血红素生物合成以及细胞周期退出。KLF1 通过塑造红系增强子和启动子处的染色质可及性与转录活性,影响血红蛋白转换以及红细胞分化轨迹。KLF1 的遗传扰动与红系发育改变及血红蛋白表达模式变化相关,支持其在模拟遗传性红细胞表型与解析珠蛋白调控机制方面的重要性。
EKLF/KLF1 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 KLF1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对KLF1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏KLF1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了KLF1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。