Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF4E2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403245-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- eIF4E2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- eIF4E2ダブルニカースプラスミド（h）およびeIF4E2ダブルニカースプラスミド（h2）は、EIF4E2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: eIF4E2 抗体 (YB-18): sc-100731
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
eIF4E2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403245-NIC | 20 µg | $410.00 |
EIF4E2は、eIF4E2（4EHPとしても知られる）をコードする。eIF4E2はキャップ結合型の翻訳開始因子であり、5′末端のm7GキャップをめぐってeIF4Eと競合し、選択的な翻訳抑制を協調的に進めることでmRNAの運命を調節する。eIF4E2は、RNA結合タンパク質やmiRNAエフェクター複合体との相互作用を通じて転写後遺伝子制御に関与し、発生・分化・ストレス応答を制御する経路において、mRNAの安定性やリボソーム動員に影響を与える。さらに、低酸素適応型の翻訳プログラムやプロテオスタシスとも関連し、細胞生存や代謝に関わるタンパク質合成のあり方を形作ることが示されている。eIF4E2関連ネットワークが関与するキャップ依存的翻訳制御の破綻は、翻訳選択性の変化によって遺伝子発現の出力が組み替わり得るという点で、腫瘍生物学、神経生物学、細胞のストレス適応の研究において重要である。
eIF4E2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EIF4E2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EIF4E2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EIF4E2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EIF4E2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。