eIF4E Double Nickaseプラスミド (h): sc-400415-NIC

EIF4Eは、mRNAの7-メチルグアノシンキャップを認識し、リボソームのリクルートを促進してタンパク質合成の開始を助ける翻訳開始複合体eIF4Fのキャップ結合サブユニットであるeIF4Eをコードします。eIF4Eの活性は、4E-BPタンパク質による制御やMNK依存的リン酸化を介してPI3K–AKT–mTOR経路およびMAPK経路からのシグナルを統合し、増殖・生存・ストレス応答に関与する転写産物の選択的翻訳へと成長シグナルを結び付けます。EIF4Eの発現やシグナル制御の破綻は、がん生物学における異常な翻訳リプログラミングと関連しており、神経発達やウイルス―宿主相互作用に関する研究でも関与が示唆されています。キャップ依存的翻訳の中心的ノードとして、EIF4Eはヒト細胞モデルにおける翻訳制御、mRNA選択、ならびにプロテオスタシス関連表現型の解析に広く用いられています。

eIF4E ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EIF4E 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EIF4E内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EIF4Eの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EIF4Eが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。