eIF4E Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400415-NIC

EIF4E codifica a eIF4E, a subunidade do complexo de iniciação da tradução eIF4F que se liga ao "cap" e reconhece a estrutura 7‑metilguanosina no extremo 5' dos mRNAs, promovendo o recrutamento de ribossomos para iniciar a síntese proteica. A atividade da eIF4E integra sinais das vias PI3K–AKT–mTOR e MAPK por meio da regulação por proteínas 4E‑BP e da fosforilação dependente de MNK, conectando estímulos de crescimento à tradução seletiva de transcritos envolvidos em proliferação, sobrevivência e respostas ao estresse. A desregulação da expressão de EIF4E ou do seu controle por sinalização está associada a uma reprogramação translacional aberrante na biologia do câncer e também tem sido implicada em estudos de neurodesenvolvimento e de interações vírus‑hospedeiro. Como um nó central da tradução dependente de cap, EIF4E é amplamente utilizado para investigar controle translacional, seleção de mRNA e fenótipos relacionados à proteostase em modelos de células humanas.

eIF4E O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EIF4E em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EIF4E. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EIF4E. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EIF4E interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.