eIF2C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400813-ACT

ヒトAGO2（eIF2C2）はArgonaute-2をコードしており、これはRNA誘導サイレンシング複合体（RISC）の触媒中核として、小分子RNAに結合し、標的転写産物に対する配列特異的な抑制を誘導します。AGO2は、miRNAおよびsiRNAに誘導されるmRNA切断、翻訳抑制、ならびに脱アデニル化を介して転写後遺伝子制御を担い、細胞周期制御、分化、自然免疫シグナル伝達、ストレス応答に関与するプログラムを形成します。RNA干渉の中心的エフェクターとして、AGO2は小分子RNA経路を介してトランスクリプトームの安定性やエピジェネティック制御にも影響を与えます。AGO2活性の制御不全やmiRNA–AGO2へのロード（搭載）の変化は、がん化（腫瘍化）や神経発達表現型など、複数の疾患関連状況でみられる異常な遺伝子発現ネットワークと関連づけられており、RNAサイレンシングの機構研究における有用性を支持しています。

eIF2C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AGO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF2C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AGO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAGO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF2Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAGO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF2C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAGO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF2C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。