eIF2α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400199
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eIF2α O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico eIF2α, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:eIF2α Anticorpo (D-3): sc-133132
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eIF2α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400199 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
EIF2S1 codifica a subunidade alfa do fator de iniciação da tradução eucariótica 2 (eIF2α), um regulador central da iniciação da tradução dependente de cap e da proteostase. A fosforilação de eIF2α em Ser51 integra múltiplas quinases sensoras de estresse (PERK/EIF2AK3, GCN2/EIF2AK4, PKR/EIF2AK2 e HRI/EIF2AK1) para modular a disponibilidade do complexo ternário, suprimir a síntese proteica global e promover programas seletivos de tradução, como o de ATF4, no âmbito da resposta integrada ao estresse. Por essa via, eIF2α conecta o estresse do retículo endoplasmático, a privação de aminoácidos, o reconhecimento de vírus e o estresse oxidativo a um remodelamento adaptativo da transcrição e da tradução. A desregulação da sinalização de eIF2α está implicada na tolerância de células cancerosas ao estresse, em fenótipos de agregação proteica associados a doenças neurodegenerativas e em estados metabólicos e inflamatórios, por meio de controle translacional alterado e da dinâmica de grânulos de estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO eIF2α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EIF2S1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EIF2S1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EIF2S1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína eIF2α.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EIF2S1 para a investigação da sinalização de eIF2α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EIF2S1 críticos para a função eIF2α
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EIF2S1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo eIF2α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo eIF2α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EIF2S1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo eIF2α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR eIF2α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EIF2S1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EIF2S1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.