eIF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423216

概要

マウスのEif1は、真核生物翻訳開始因子1（eIF1）をコードしている。eIF1は43Sプレイニシエーション複合体の保存された構成要素であり、キャップ依存的翻訳開始における開始コドンの正確な選択を促進する。スキャニングの厳密性を高め、40Sサブユニットの開いたコンフォメーションを安定化させることで、eIF1は全体的なタンパク質合成量とプロテオームの忠実性の制御に寄与する。この機能によりEif1は、mRNA選択的な開始を介して細胞増殖、ストレス適応、分化を形作る翻訳制御プログラムと結び付けられる。翻訳開始の忠実性の破綻は、プロテオスタシスの変化や異常な増殖シグナルを特徴とする疾患関連状態に広く関与しており、そのためEif1は翻訳制御異常の機構研究に有用な標的（ノード）となる。

eIF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF1の機能に不可欠なEif1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびeIF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF1 HDRプラスミド（m）および eIF1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。