EF-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420117

Panoramica

Eef2 codifica il fattore di elongazione eucariotico 2 (EF-2), una GTPasi conservata che guida la traslocazione ribosomiale durante la fase di elongazione della traduzione dell’mRNA e, di conseguenza, controlla i tassi globali di sintesi proteica. L’attività di EF-2 è regolata in modo stringente dalla fosforilazione mediata dalla chinasi eEF2, a valle di vie che percepiscono nutrienti e stress, inclusa la segnalazione mTOR, collegando l’output traduttivo allo stato energetico, all’ipossia e all’attività sinaptica. Grazie al suo ruolo centrale nella proteostasi, EF-2 influenza la crescita cellulare, le risposte allo stress e i programmi di differenziamento che dipendono da un rapido rimodellamento del proteoma. Un controllo traduttivo deregolato che coinvolge EF-2 ed eEF2K è stato implicato in disfunzioni neurologiche e nell’adattamento metabolico associato ai tumori, rendendo Eef2 un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione della traduzione nei sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EF-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eef2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eef2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eef2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EF-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eef2 per lo studio della segnalazione di EF-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eef2 critici per la funzione di EF-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eef2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eef2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EF-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EF-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eef2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eef2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.