EDIL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404813-ACT

EDIL3 (repetições do tipo EGF e domínios do tipo discoidina I 3), também conhecido como DEL-1, codifica uma glicoproteína secretada associada à matriz extracelular que modula a adesão celular, a migração e o remodelamento tecidual por meio de interações dependentes de integrinas. Em células humanas, o EDIL3 participa da regulação do comportamento endotelial e de sinais extracelulares que moldam microambientes angiogênicos e inflamatórios, influenciando a dinâmica leucócito–endotélio e a organização da matriz. A expressão desregulada de EDIL3 tem sido relatada em contextos de remodelamento vascular e no estroma associado a tumores, reforçando sua relevância para estudos de angiogênese, regulação imune e biologia do nicho metastático. Essas propriedades tornam o EDIL3 um alvo útil para dissecar a sinalização da matriz extracelular, a comunicação cruzada de vias de integrinas e fenótipos dirigidos pelo microambiente.

EDIL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EDIL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EDIL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EDIL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EDIL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EDIL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EDIL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EDIL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EDIL3 em células tumorais com expressão de EDIL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.