EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400413-NIC

S1PR1 (EDG-1/S1P1) codifica um receptor acoplado à proteína G para a esfingosina-1-fosfato que regula a integridade da barreira endotelial, a maturação vascular e o tráfego de células imunes. A ativação do receptor desencadeia sinalização dependente de Gi, com vias a jusante de PI3K–AKT, MAPK/ERK e GTPases da família Rho, que moldam a dinâmica do citoesqueleto, a organização das junções aderentes e as respostas quimiotáticas. Em contextos hematopoéticos e vasculares, o S1PR1 contribui para a saída de linfócitos, o brotamento angiogênico e o tônus inflamatório por meio da integração com redes de citocinas e quimiocinas. A desregulação da sinalização do S1PR1 tem sido associada a alterações da permeabilidade vascular e da homeostase imune em estudos de inflamação, biologia cardiovascular e microambiente tumoral, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas de sinalização por receptores.

EDG-1/S1P1/S1PR1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus S1PR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de S1PR1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função S1PR1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com S1PR1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.