Ebi3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401552-ACT

O gene humano **EBI3** codifica a subunidade **Ebi3**, um componente de citocina secretada da família da **IL-12** que se associa à **p28** para formar a **IL-27** e à **p35** para formar a **IL-35**. Por meio desses heterodímeros, a Ebi3 influencia a sinalização imune mediada por **JAK/STAT**, moldando a diferenciação de células T, as respostas de células apresentadoras de antígeno e programas de regulação imunológica. A expressão de **EBI3** é induzida em células B ativadas, células dendríticas e macrófagos, conectando sinais da imunidade inata a desfechos da imunidade adaptativa. A desregulação da sinalização de citocinas associadas a **EBI3** tem sido estudada em contextos de inflamação crônica, biologia de infecções e imunologia tumoral, nos quais alterações na regulação imune podem contribuir para microambientes associados à doença.

Ebi3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EBI3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ebi3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EBI3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EBI3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ebi3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EBI3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ebi3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ebi3 em células tumorais com expressão de EBI3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.