EBF4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402438-ACT

EBF4 (fator precoce de célula B 4) codifica um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice dentro da família EBF, que se liga ao DNA e coordena programas de expressão gênica restritos a determinadas linhagens. Embora seja menos caracterizado do que outros parálogos de EBF, o EBF4 está implicado na regulação de redes transcricionais associadas à diferenciação celular, ao padrão de desenvolvimento e à manutenção da identidade celular por meio da ocupação de enhancers e promotores. Ao moldar estados de cromatina acessível e saídas transcricionais, o EBF4 pode influenciar processos como o controle da proliferação, a adaptação metabólica e a expressão gênica responsiva ao estresse. A desregulação dos circuitos transcricionais da família EBF tem sido associada a estados de diferenciação aberrantes e à reprogramação transcricional relevante para doenças, tornando o EBF4 um alvo útil para estudos mecanísticos de redes regulatórias de genes.

EBF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EBF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EBF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EBF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EBF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EBF4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EBF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EBF4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EBF4 em células tumorais com expressão de EBF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.