EAP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406312

概要

SNF8はEAP30をコードしており、EAP30はESCRT-II複合体の中核構成要素として、ユビキチン化された膜タンパク質をエンドソームで選別し、多小胞体（MVB）へ取り込んでリソソーム分解へ導く過程を統括します。ESCRT依存的な膜リモデリングを介して、EAP30は受容体のダウンレギュレーション、エンドリソソーム輸送、ならびに内腔小胞形成時におけるESCRT-IIとESCRT-IIIの連携を支えます。これらのプロセスは、シグナル伝達経路の減衰、膜タンパク質恒常性、そしてESCRT機構に依存する細胞質分裂やウイルス出芽の一部にも影響します。ESCRT介在性トラフィッキングの破綻は、増殖因子受容体シグナルの変調、プロテオスタシスストレス、ゲノム不安定性と関連づけられており、SNF8/EAP30はがん生物学や神経変性に伴うエンドリソソーム異常の研究において重要な対象となります。

EAP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSNF8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SNF8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SNF8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EAP30タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EAP30シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SNF8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EAP30の機能に不可欠なSNF8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SNF8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EAP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEAP30 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SNF8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EAP30 HDRプラスミド（h）および EAP30 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSNF8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSNF8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。