EAF1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-428881-LAC

O gene murino **Eaf1** codifica a EAF1, um cofator nuclear de transcrição originalmente caracterizado por sua associação a fatores de elongação da família ELL e ao **Super Elongation Complex**, o que o vincula à liberação da pausa da RNA polimerase II e à transcrição produtiva. A EAF1 participa da regulação de programas de expressão gênica que influenciam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a transcrição responsiva ao estresse, e pode interagir com a maquinaria regulatória associada à cromatina. A desregulação de vias de elongação e de controle transcricional que envolvem a EAF1 tem sido estudada no contexto de complexos transcricionais relevantes para malignidades hematológicas e de modelos mais amplos de “dependência” oncogênica de transcrição. Em sistemas murinos, portanto, a perturbação de **Eaf1** é útil para dissecar como o controle da elongação transcricional impacta a especificação de linhagem e estados de expressão gênica associados a doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais EAF1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Eaf1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais EAF1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Eaf1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de EAF1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Eaf1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.