Plásmido Doble Nickase (h) E2F-5: sc-401915-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)E2F-5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa E2F-5 (h) y el plásmido de doble nickasa E2F-5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a E2F5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: E2F-5 Anticuerpo (C-8): sc-374268
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) E2F-5 | sc-401915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) E2F-5 | sc-401915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
E2F5 codifica E2F-5, un miembro de la familia E2F de factores de transcripción que coordina el control del ciclo celular al regular genes necesarios para la transición G1/S, la replicación del ADN y las respuestas de control de puntos de control. La función de E2F-5 está estrechamente vinculada al eje RB/E2F, integrando la actividad de las ciclinas–CDK con programas transcripcionales que moldean la proliferación, la diferenciación y la quiescencia. Mediante la unión a promotores en conjunto con proteínas DP y represores de la familia RB, E2F-5 influye en la cromatina y en la salida transcripcional de vías que gobiernan el control del crecimiento y las decisiones sobre el destino celular. La señalización desregulada de E2F5 se ha asociado con estados proliferativos aberrantes y programas transcripcionales vinculados a tumores, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la desregulación del ciclo celular en contextos relevantes para la enfermedad.
E2F-5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus E2F5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de E2F5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de E2F5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con E2F5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.