E2F-4 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-430537-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- E2F-4O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase E2F-4 (m) e o Plasmídeo Double Nickase E2F-4 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para E2f4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:E2F-4 Anticorpo (D-7): sc-398543
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
E2F-4 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-430537-NIC | 20 µg | $410.00 |
E2F-4 (E2f4) é um fator de transcrição da família E2F que regula a progressão do ciclo celular e decisões de destino celular ao controlar a expressão de genes necessários para a transição G1/S e para a replicação do DNA. Em células de camundongo, o E2F-4 comumente atua com parceiros DP e se associa a proteínas do tipo “pocket”, como p107 e p130, para impor repressão transcricional durante a quiescência e a diferenciação. Por meio desses complexos, o E2F-4 contribui para o controle da rede RB/E2F sobre a proliferação, a integridade de checkpoints e a regulação da expressão gênica ligada à cromatina. A desregulação da sinalização da via E2F é amplamente relevante para a proliferação oncogênica e para estados de diferenciação alterados, tornando o E2f4 um alvo útil para estudos mecanísticos em biologia do câncer e em modelos de desenvolvimento.
E2F-4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus E2f4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de E2f4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função E2f4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com E2f4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.