E-cadherin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400031-NIC

CDH1 codifica a E-caderina, uma proteína de junções aderentes dependente de Ca2+ que medeia a adesão homofílica célula–célula e mantém a polaridade epitelial e a arquitetura tecidual. Por meio da ligação à β-catenina, à p120-catenina e ao citoesqueleto de actina, a E-caderina coordena a remodelação das junções, a inibição por contato e a mecanotransdução, além de modular indiretamente a sinalização Wnt/β-catenina ao influenciar a disponibilidade de β-catenina. A desregulação de CDH1 compromete a integridade da barreira epitelial e promove programas de desdiferenciação celular, como a transição epitélio–mesênquima, processos frequentemente estudados em invasão, fenótipos associados à metástase e alterações da morfogênese tecidual. A perda ou disfunção de CDH1 é recorrente em cânceres epiteliais e também está implicada no câncer gástrico difuso hereditário, tornando-o um locus-chave para investigar a sinalização dependente de adesão e a homeostase epitelial em modelos humanos.

E-cadherin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CDH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CDH1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CDH1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CDH1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.