Dyrk1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403880-ACT

DYRK1B codifica a quinase de dupla especificidade regulada por fosforilação de tirosina 1B (Dyrk1B), uma quinase de serina/treonina que modula a progressão do ciclo celular, a quiescência celular e programas de diferenciação por meio da fosforilação de proteínas regulatórias. A atividade de Dyrk1B se integra a redes de sinalização que controlam respostas ao estresse e a homeostase metabólica, incluindo vias que influenciam o controle transcricional, a degradação de proteínas e a sinalização dependente de fatores de crescimento. Alterações na expressão de DYRK1B ou na atividade da quinase têm sido associadas a fenótipos de proliferação e sobrevivência desregulados, tornando-o relevante para estudos de sinalização oncogênica, remodelamento tecidual e biologia de doenças metabólicas. Como regulador endógeno de saídas de sinalização mediadas por quinases, DYRK1B é frequentemente investigado por seu papel na comunicação cruzada entre vias e no controle dependente do contexto de estados de expressão gênica.

Dyrk1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DYRK1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dyrk1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DYRK1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DYRK1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dyrk1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DYRK1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dyrk1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dyrk1B em células tumorais com expressão de DYRK1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.