dUTPase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405843

Panoramica

DUT codifica la dUTPasi umana, un enzima chiave del metabolismo dei nucleotidi che idrolizza il dUTP in dUMP e pirofosfato, mantenendo così basse le riserve intracellulari di dUTP e fornendo il substrato per la biosintesi del timidilato. Limitando l’incorporazione di uracile nel DNA genomico, la dUTPasi sostiene la fedeltà della replicazione e la stabilità del genoma e si integra funzionalmente con le vie di riparazione per escissione di basi che rimuovono l’uracile dal DNA. Alterazioni dell’attività di DUT possono modulare le risposte allo stress replicativo e la segnalazione del danno al DNA, processi spesso perturbati nei disturbi proliferativi e nelle cellule sottoposte a stress genotossico. In quanto nodo centrale dell’omeostasi delle pirimidine, DUT è ampiamente studiato nel contesto della progressione del ciclo cellulare, del mantenimento del DNA mitocondriale e nucleare e della mutagenesi guidata da squilibri dei nucleotidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO dUTPase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DUT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DUT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DUT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina dUTPase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DUT per lo studio della segnalazione di dUTPase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DUT critici per la funzione di dUTPase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DUT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal dUTPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal dUTPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DUT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal dUTPase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR dUTPase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DUT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DUT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.