Plásmido CRISPR de Activación (h) DUOX2: sc-403534-ACT

DUOX2 codifica la dual oxidasa 2, un miembro de la familia de oxidasas NADPH que genera peróxido de hidrógeno en la membrana plasmática y dentro de las vías secretoras, apoyando la señalización redox epitelial y el procesamiento oxidativo de proteínas. La actividad de DUOX2 contribuye a la defensa mucosa innata y a la señalización inflamatoria al aportar H2O2 para reacciones antimicrobianas mediadas por peroxidasas y al modular vías sensibles a las ROS, como NF-κB y las redes de citocinas. En la tiroides, el H2O2 derivado de DUOX2 es necesario para la organificación del yoduro y la yodación de la tiroglobulina, vinculando esta enzima con la biosíntesis hormonal. Las alteraciones en la expresión o la función de DUOX2 se han asociado con disormonogénesis tiroidea y con fenotipos inflamatorios epiteliales relevantes para modelos de enfermedad gastrointestinal y de las vías respiratorias.

DUOX2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DUOX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DUOX2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DUOX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DUOX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DUOX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DUOX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DUOX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DUOX2 en células tumorales con expresión de DUOX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.