DUOX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403534-ACT

DUOX2 codifica a dual oxidase 2, um membro da família das NADPH oxidases que gera peróxido de hidrogênio na membrana plasmática e em vias secretórias, sustentando a sinalização redox epitelial e o processamento oxidativo de proteínas. A atividade de DUOX2 contribui para a defesa inata das mucosas e para a sinalização inflamatória ao fornecer H2O2 para reações antimicrobianas mediadas por peroxidases e ao modular vias sensíveis a EROs (espécies reativas de oxigênio), como a NF-κB e redes de citocinas. Na tireoide, o H2O2 derivado de DUOX2 é necessário para a organificação do iodeto e a iodação da tireoglobulina, ligando essa enzima à biossíntese hormonal. Alterações na expressão ou na função de DUOX2 têm sido associadas à dis-hormonogênese tireoidiana e a fenótipos inflamatórios epiteliais relevantes para modelos de doenças gastrointestinais e das vias aéreas.

DUOX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DUOX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DUOX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DUOX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DUOX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DUOX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DUOX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DUOX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DUOX2 em células tumorais com expressão de DUOX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.