DRIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409900

概要

UTP20（DRIMとしても知られる）は、リボソーム生合成に必須の核小体因子をコードしており、pre-rRNAの成熟および60S大型リボソームサブユニットの組み立てに機能します。核小体の恒常性と効率的なリボソーム産生を支えることで、DRIMは細胞全体の翻訳能とプロテオスタシスに寄与し、これらは細胞増殖やストレス適応と密接に関連しています。リボソーム生合成の破綻は核小体ストレスシグナル伝達やp53依存性チェックポイントを作動させうるため、DRIMに関連する経路は増殖制御とも結びつきます。リボソーム産生の制御異常はがんやその他の細胞増殖異常を伴う疾患でしばしば観察されることから、DRIMは翻訳制御やストレス応答の機構研究における有用な結節点となります。

DRIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUTP20遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UTP20内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UTP20のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DRIMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DRIMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UTP20欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DRIMの機能に不可欠なUTP20エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UTP20ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DRIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDRIM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UTP20遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DRIM HDRプラスミド（h）および DRIM HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUTP20ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUTP20標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。