DRIM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409900-ACT

UTP20はDRIMをコードしており、DRIMは18S rRNAの成熟とリボソーム小サブユニットの組み立てに必要な核小体局在のリボソーム生合成因子です。DRIMは前駆体リボソームRNA（pre-rRNA）のプロセシングおよび核小体の組織化に関与し、rRNA合成を細胞増殖制御や全体的な翻訳能と結び付けています。リボソーム生合成の破綻や核小体ストレス経路の異常は、増殖性表現型やプロテオスタシスの変化と広く関連しているため、UTP20/DRIMは増殖シグナル伝達、細胞周期進行、ストレス適応的な転写プログラムの研究において重要な対象となります。DRIMは基本的なRNAプロセシング機構の中核成分であることから、その撹乱は、ヒト細胞モデルにおけるリボソーム病関連の分子シグネチャーを解明するための機序的な切り口を提供します。

DRIM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UTP20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DRIM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UTP20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUTP20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DRIMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUTP20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDRIM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUTP20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDRIM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。