Dnmt2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402709-ACT

TRDMT1はDnmt2をコードしており、Dnmt2は進化的に保存されたシトシン5位メチルトランスフェラーゼです。主に特定のtRNA、なかでもtRNAAspをメチル化することで、細胞ストレス下におけるRNAの安定性とプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持を支えます。RNAメチル化を介して、Dnmt2は翻訳の忠実性、ストレス応答シグナル伝達、そして細胞の増殖や分化プログラムに影響し得るエピトランスクリプトーム制御の維持に寄与します。TRDMT1活性の変化は、ゲノム安定性、アポトーシス、ストレス誘導性損傷への感受性に関連するRNA修飾パターンの変動と結び付けられています。これらの過程の破綻は、RNA修飾と翻訳制御がしばしば攪乱されるがん生物学、神経生物学、炎症シグナル伝達の機構研究において重要です。

Dnmt2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRDMT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dnmt2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRDMT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRDMT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dnmt2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRDMT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDnmt2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRDMT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDnmt2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。