DnaJB4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403159-ACT

O gene humano **DNAJB4** codifica a **DnaJB4**, uma co-chaperona de domínio J da família **HSP40** que regula a atividade ATPase da **HSP70** para promover o dobramento, o redobramento e o direcionamento de proteínas clientes para degradação. Ao participar de redes de proteostase, a DnaJB4 contribui para o controle de qualidade citosólico e para respostas adaptativas ao estresse, influenciando o processamento de proteínas mal dobradas ou propensas à agregação. Essas funções se cruzam com vias que controlam a homeostase proteica, incluindo a autofagia assistida por chaperonas e mecanismos de depuração ligados ao proteassoma. A desregulação de sistemas de chaperonas é relevante para distúrbios caracterizados por proteostase comprometida, incluindo neurodegeneração e miopatias, tornando o **DNAJB4** um ponto útil para estudos mecanísticos de estresse celular e controle de qualidade proteica.

DnaJB4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNAJB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DnaJB4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNAJB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNAJB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DnaJB4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNAJB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DnaJB4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DnaJB4 em células tumorais com expressão de DNAJB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.