DNA-PKCS Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422405-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DNA-PKCSO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase DNA-PKCS (m) e o Plasmídeo Double Nickase DNA-PKCS (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Prkdc. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DNA-PKCS Anticorpo (G-12): sc-390849
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DNA-PKCS Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-422405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA-PKCS Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-422405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prkdc codifica a subunidade catalítica da proteína quinase dependente de DNA, a DNA-PKCS, um regulador central do reparo de quebras de dupla fita do DNA pela via de junção de extremidades não homólogas (NHEJ). A DNA-PKCS forma um holoenzima ativo com Ku70/Ku80 para coordenar o reconhecimento das extremidades, a sinapse e o processamento das extremidades, e participa da recombinação V(D)J e da recombinação de troca de classe em linfócitos em desenvolvimento. Como componente central da resposta a danos no DNA, a DNA-PKCS influencia a sinalização de checkpoints do ciclo celular, a estabilidade do genoma e a sensibilidade celular ao estresse genotóxico. A função alterada de PRKDC é comumente utilizada para modelar defeitos em NHEJ, fenótipos de instabilidade cromossômica e mecanismos subjacentes a vulnerabilidades de reparo de DNA relevantes para imunodeficiência e câncer em sistemas murinos.
DNA-PKCS O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Prkdc em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Prkdc. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Prkdc. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Prkdc interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.