Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DNA Ligase IV Double Nickaseプラスミド (h): sc-401372-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DNA Ligase IV Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DNA Ligase IVダブルニカースプラスミド（h）およびDNA Ligase IVダブルニカースプラスミド（h2）は、LIG4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: DNA Ligase IV 抗体 (D-8): sc-271299
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DNA Ligase IV Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA Ligase IV Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LIG4 は DNA リガーゼ IV をコードしており、古典的非相同末端結合（c-NHEJ）において DNA 二本鎖切断（DSB）端を封鎖する ATP 依存性リガーゼです。DNA リガーゼ IV は XRCC4、XLF/NHEJ1、および DNA-PK 複合体と協調して働き、ゲノム安定性、V(D)J 組換え、ならびに電離放射線誘発性損傷の修復に必須です。LIG4 の機能破綻は二本鎖切断修復の忠実度を低下させ、染色体異常や遺伝毒性ストレスに対する感受性の増大を引き起こします。病的バリアントは LIG4 症候群や、より広範な免疫不全および放射線過敏性の表現型と関連しており、この経路は DNA 損傷応答およびリンパ球発生の研究において中心的な位置を占めます。
DNA Ligase IV ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LIG4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LIG4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LIG4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LIG4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。