DMP-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402197-NIC

DMP1 codifica la dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1), una fosfoproteina della matrice extracellulare appartenente alla famiglia SIBLING, che viene processata proteoliticamente e contribuisce alla formazione dei tessuti mineralizzati. DMP-1 regola la maturazione degli osteociti e l’omeostasi del fosfato e si integra con i programmi di biomineralizzazione che coordinano l’organizzazione della matrice collagenica con la deposizione di idrossiapatite. Nella biologia dell’osso e del dente, DMP-1 influenza reti di segnalazione collegate al rimodellamento della matrice extracellulare, alle interazioni cellula–matrice associate alle integrine e alla gestione degli ioni minerali. Alterazioni della funzione o dell’espressione di DMP1 sono associate a fenotipi di rachitismo/osteomalacia ipofosfatemici ereditari e ad altri disturbi della mineralizzazione della dentina e dell’osso, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biologia della matrice scheletrica.

DMP-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DMP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DMP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DMP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DMP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.