DMP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402197-ACT

DMP1 codifica a fosfoproteína ácida da matriz dentinária 1 (DMP-1), uma fosfoproteína da matriz extracelular que regula a deposição mineral e a homeostase do fosfato durante o desenvolvimento esquelético e dentário. A DMP-1 é processada em fragmentos funcionais que influenciam a maturação de osteócitos, a dentinogênese e a organização da hidroxiapatita por meio de interações com cálcio/fosfato e componentes da matriz. No osso, a DMP-1 está associada a redes de sinalização mediadas por osteócitos que acoplam a mineralização da matriz a vias reguladoras de fosfato, incluindo a modulação de processos associados ao FGF23. Alterações na expressão ou na função de DMP1 estão associadas a distúrbios da densidade mineral óssea e da formação de dentina, reforçando sua relevância em estudos de biologia da mineralização e de fenótipos esqueléticos hereditários.

DMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DMP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DMP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DMP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DMP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DMP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DMP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DMP-1 em células tumorais com expressão de DMP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.