Plásmido Doble Nickase (h) Dlx-5: sc-401825-NIC

DLX5 codifica Dlx-5, un factor de transcripción con homeobox que dirige la especificación del destino celular y los programas de patrón durante el desarrollo, con funciones destacadas en la diferenciación osteogénica y en la morfogénesis craneofacial, de las extremidades y del oído interno. Dlx-5 actúa en redes de regulación transcripcional aguas abajo de vías de señalización del desarrollo como BMP/TGF-β e interactúa con programas génicos centrados en RUNX2 para controlar la expresión de genes asociados a la matriz extracelular y a la mineralización. Alteraciones en la dosis de DLX5 o disrupciones de su regulación se han asociado con fenotipos de malformaciones congénitas, y se ha descrito expresión desregulada de DLX5 en contextos de proliferación y diferenciación aberrantes en biología del cáncer. Como regulador de linaje y diferenciación, DLX5 se estudia con frecuencia en modelos de desarrollo esquelético, transiciones epitelio-mesenquimatosas y tejidos derivados de la cresta neural.

Dlx-5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DLX5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DLX5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DLX5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DLX5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.