DLEC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409763-ACT

DLEC1 (deleted in lung and esophageal cancer 1) codifica uma grande proteína citoplasmática cuja expressão é frequentemente reduzida em múltiplos tipos de tumor, o que é compatível com funções na manutenção do controlo normal do crescimento. Estudos publicados associam a DLEC1 à regulação da progressão do ciclo celular, à organização do citoesqueleto e a programas de diferenciação celular, processos que moldam a proliferação e a homeostase tecidular. A perda ou o silenciamento de DLEC1 tem sido associado a mecanismos epigenéticos, como a hipermetilação do promotor e a regulação transcricional alterada. Estas características tornam a DLEC1 um alvo útil para investigar redes do tipo supressor tumoral, repressão transcricional e reprogramação de vias em contextos celulares relevantes para o cancro.

DLEC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DLEC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DLEC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DLEC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DLEC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DLEC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DLEC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DLEC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DLEC1 em células tumorais com expressão de DLEC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.