DLD Lentiviral Activation Particles (h): sc-403207-LAC

ヒトDLDは、ジヒドロリポアミド脱水素酵素をコードしており、ミトコンドリアに局在するFAD依存性酸化還元酵素として、酸化型リポアミドを再生することで複数の脱水素酵素複合体の触媒サイクルを維持します。DLDは、ピルビン酸脱水素酵素、α-ケトグルタル酸脱水素酵素、分岐鎖α-ケト酸脱水素酵素に共通するE3サブユニットとして、NADH産生を介して解糖系由来の炭素流入およびTCA回路のフラックスを、アミノ酸分解とレドックス恒常性に結び付けます。DLD活性はミトコンドリアのエネルギー代謝と活性酸素種（ROS）バランスに寄与し、代謝ストレス応答を形作る経路との関連も示唆されます。DLDの遺伝学的または機能的な異常は、ミトコンドリア代謝疾患や細胞の生体エネルギー特性の変化と関連づけられており、神経代謝表現型やミトコンドリア機能障害の機序を研究する上で有用な標的であることを支持します。

DLD レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なDLDの発現上昇を可能にします。

DLD レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、DLD転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性DLDの発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のDLDゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。