Dia 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403238

概要

DIAPH2（Dia 2）は、RhoファミリーGTPaseシグナル伝達の下流でアクチンフィラメントの核形成および伸長を制御する、diaphanous関連フォルミンをコードしています。細胞骨格リモデリングにおける役割を通じて、DIAPH2は細胞形態の制御、接着ダイナミクス、方向性のある移動に寄与し、これらは細胞質分裂や細胞極性の維持と密接に結び付いた過程です。フォルミン依存的なアクチン構造の変化は、紡錘体の位置決めやゲノム安定性を乱し得るため、DIAPH2関連経路を増殖および発生に関わる表現型と結び付けます。DIAPH2はまた、細胞骨格制御の破綻が関与する生殖生物学や、がん化に伴う細胞挙動の文脈でも研究されています。

Dia 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDIAPH2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DIAPH2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DIAPH2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dia 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dia 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DIAPH2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dia 2の機能に不可欠なDIAPH2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DIAPH2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dia 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDia 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DIAPH2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dia 2 HDRプラスミド（h）および Dia 2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDIAPH2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDIAPH2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。