Dia 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420000-KO-2

概要

Diaph1（mDia1）は、RhoA を含む Rho ファミリー GTPase の下流で直鎖状 F-アクチンの組み立てを制御する、アクチンの核形成・伸長因子である formin「Dia1」をコードします。Dia1 は、シグナル入力をアクチン動態および微小管の安定化に結び付けることで、細胞極性、接着、細胞質分裂、有向性遊走といった細胞骨格リモデリング過程を支えます。これらの機能を通じて、Diaph1 は免疫細胞トラフィッキング、血管・上皮バリアの挙動、メカノトランスダクションを制御する経路の研究でしばしば対象となります。DIAPH1 活性の変化は、血小板や血液学的表現型、進行性の感音性難聴など、細胞骨格関連の病態生理と関連付けられており、マウス系での機構研究が動機付けられています。

Dia 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDiaph1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Diaph1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Diaph1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dia 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dia 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Diaph1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dia 1の機能に不可欠なDiaph1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Diaph1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dia 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDia 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Diaph1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dia 1 HDRプラスミド（m）および Dia 1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDiaph1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDiaph1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。