Dia 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401929-ACT

DIAPH1（Dia 1）は、Rho GTPase シグナル伝達の下流でアクチンフィラメントの核形成および伸長を制御する、Diaphanous 関連フォルミンをコードします。Dia 1 は、細胞極性、接着、細胞質分裂、指向性移動に必要な細胞骨格リモデリングを協調して制御し、さらにアクチン―微小管クロストークを介して微小管の安定化にも寄与します。これらの過程を通じて、DIAPH1 はフィロポディア形成や収縮環の組み立てを含む、メカノトランスダクションおよび膜動態を司る経路に影響を与えます。DIAPH1 活性の制御異常は、細胞運動性や分裂表現型の変化と関連しており、文献では発生ならびに血液学的／血管系の表現型との関連も報告されています。これらの知見は、本遺伝子が疾患メカニズム研究において重要であることを示唆します。

Dia 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DIAPH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dia 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DIAPH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDIAPH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dia 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDIAPH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDia 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDIAPH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDia 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。