DHODH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402983

概要

ヒトDHODH（ジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ）はミトコンドリア内膜に局在するフラボタンパク質で、ユビキノンを介して呼吸鎖と結び付けながら、de novoピリミジン生合成においてジヒドロオロト酸をオロト酸へ酸化する律速反応を触媒する。DHODHはUMPの利用可能量を制御することで、DNA/RNA合成、細胞周期の進行、ならびに増殖ストレス下での代謝適応を支える。DHODH活性の攪乱はヌクレオチドプール、複製ダイナミクス、ミトコンドリアのレドックスバランスを再編し、ゲノム維持と細胞のバイオエネルギー制御に関わる経路と結び付いている。ピリミジン代謝の破綻やDHODHへの依存性は、がん細胞の増殖や免疫細胞の活性化など、複数の疾患関連状況で観察されている。

DHODH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDHODH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DHODH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DHODHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DHODHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DHODHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DHODH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DHODHの機能に不可欠なDHODHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DHODHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DHODH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDHODH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DHODH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DHODH HDRプラスミド（h）および DHODH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDHODHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDHODH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。