Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
DHFR Antibody (A-9): sc-377091. Western blot analysis of DHFR expression in K-562 (A) and A-431 (B) whole cell lysates.
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DHFR双切口酶质粒(h): sc-416991-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- DHFRL1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- DHFRL1双切酶质粒（h）和DHFRL1双切酶质粒（h2）编码针对DHFR2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
DHFR双切口酶质粒(h) | sc-416991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHFRL1双切口酶质粒(h2) | sc-416991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 DHFR2 编码二氢叶酸还原酶（DHFR），这是一种 NADPH 依赖性酶，催化二氢叶酸还原为四氢叶酸，从而维持一碳代谢；一碳代谢对于从头合成胸苷酸和嘌呤至关重要。DHFR 通过参与叶酸循环，支持 DNA 复制与修复、细胞周期进程，并通过与蛋氨酸/ S-腺苷甲硫氨酸（SAM）代谢的连接维持细胞甲基化能力。DHFR 活性的扰动会影响核苷酸库的平衡与基因组稳定性，这些过程常在增殖压力与代谢重塑的研究背景下被考察。因此，DHFR 生物学被广泛用于研究叶酸依赖的生物合成通路，以及细胞对核苷酸耗竭与复制压力的应答。
DHFRL1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 DHFR2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对DHFR2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏DHFR2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了DHFR2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。