DGAT2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416229-NIC

DGAT2 (diacilglicerol O-aciltransferase 2) codifica uma enzima associada ao retículo endoplasmático que catalisa a etapa final e determinante da síntese de triacilgliceróis, ao acilar o diacilglicerol com acil-CoA de ácidos graxos. Como componente central da produção de lipídios neutros, a DGAT2 sustenta a biogênese de gotículas lipídicas e se integra ao metabolismo de glicerolipídios, ao fluxo de ácidos graxos e às vias de armazenamento de energia. Alterações na atividade da DGAT2 estão associadas à desregulação do manejo de lipídios no fígado e no tecido adiposo e têm sido estudadas no contexto de mecanismos de doenças metabólicas, incluindo esteatose, remodelamento lipídico associado à resistência à insulina e fenótipos relacionados à obesidade. A DGAT2 também é utilizada como um nó funcional para investigar respostas ao estresse lipotóxico e a homeostase do RE durante sobrecarga lipídica.

DGAT2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DGAT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DGAT2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DGAT2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DGAT2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.