DGAT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416229-ACT

A DGAT2 humana (diacilglicerol O-aciltransferase 2) é uma enzima associada ao retículo endoplasmático que catalisa a etapa final e determinante da biossíntese de triacilgliceróis, ao acilar o diacilglicerol com acil-CoA de ácidos graxos. Ao controlar a produção de lipídios neutros e a biogênese de gotículas lipídicas, a DGAT2 conecta a captação de ácidos graxos e a lipogênese de novo ao armazenamento de energia celular e à homeostase dos lipídios de membrana. A atividade da DGAT2 cruza programas do metabolismo lipídico governados pela sinalização de SREBP, pelo equilíbrio da β-oxidação e por respostas ao estresse do RE durante o excesso de nutrientes. A expressão desregulada de DGAT2 e o acúmulo de triglicerídeos são frequentemente estudados na disfunção metabólica, incluindo esteatose hepática e resistência à insulina, bem como na remodelação dependente de lipídios observada em certos cânceres.

DGAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DGAT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DGAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DGAT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DGAT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DGAT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DGAT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DGAT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DGAT2 em células tumorais com expressão de DGAT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.