Desmin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400248-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Desmin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Desminダブルニカースプラスミド（h）およびDesminダブルニカースプラスミド（h2）は、DESを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Desmin 抗体 (RD301): sc-23879
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Desmin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Desmin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DESは、横紋筋および平滑筋においてZディスク、筋細胞膜（サルコレマ）、ミトコンドリア、核を連結する必須の足場を形成するIII型中間径フィラメントタンパク質であるデスミンをコードします。デスミンは、細胞骨格の構築をメカノトランスダクション（機械刺激の情報変換）、細胞小器官の配置、細胞ストレス応答と統合し、筋原線維の整列と収縮機能を支えます。また、中間径フィラメントの組み立てに関与し、アクチンおよび微小管ネットワークとのクロストークを通じて、筋細胞の分化や構造リモデリングにも影響します。病原性のDES変異やデスミンの異常な配列は、細胞質内のデスミン凝集体と筋組織の恒常性低下を特徴とするデスミン関連ミオパチーおよび心筋症と関連しており、DESは筋変性機構の解明における重要な研究対象遺伝子座です。
Desmin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DES 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DES内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DESの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DESが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。